Zakażenie rotawirusem

Zakażenie rotawirusem lub grypa jelitowa / żołądkowa jest chorobą zakaźną z leczeniem objawowym. Zakażenie rotawirusem występuje najczęściej u dzieci.

Zakażenie rotawirusem stanowi szczególne zagrożenie dla dzieci, ponieważ większość zakażeń występuje w tej konkretnej populacji.

Czynnik powodujący zakażenie rotawirusem

Zakażenie wywołują rotawirusy - wirusy z rodziny Reoviridae, które są podobne do siebie w składzie antygenowym.

Źródło infekcji

Źródłem zakażenia jest chory. Najbardziej niebezpiecznym pod względem przenoszenia zakażenia jest pacjent w pierwszych 3 - 5 dniach objawów klinicznych zakażenia rotawirusem, ponieważ w tym okresie zawartość wirusa w wydalanym kale jest największa.

Mechanizm transmisji

Głównym mechanizmem przenoszenia wirusa jest kałowo-doustny, rzadziej - szlak propagacji kontaktu z gospodarstwem domowym poprzez transfer rotawirusa z zainfekowanymi obiektami. Szczególnie niebezpieczne pod tym względem są produkty mleczne. Niskie temperatury zwykle nie niszczą wirusa, więc przechowywanie żywności w lodówce nie zapobiega rozwojowi zakażenia rotawirusem.

Okres epidemicznej infekcji rotawirusem

Wybuch choroby występuje w okresie jesienno-zimowym, jednak w innych porach roku mogą również wystąpić przypadki choroby. Z reguły rozprzestrzenianiu się i występowaniu charakterystycznych objawów zakażenia rotawirusem towarzyszy pojawienie się epidemii grypy, dlatego ludzie są zakażeni rotawirusem, bardziej znanym jako „grypa jelitowa”.

Patogeneza

Po wejściu do ludzkiego ciała wirus przenika do komórek błony śluzowej jelita cienkiego, co powoduje zniszczenie kosmków jelit. Synteza specyficznych enzymów, jak również naruszenie funkcji wydzielniczej błony śluzowej jelit, prowadzi do ciężkiej biegunki i odwodnienia organizmu z powodu dużej ilości elektrolitów i wody wpływającej do światła jelita.

Objawy zakażenia rotawirusem:

• przekrwienie błony śluzowej nosa;
• ból gardła;
• kaszel;
• ból brzucha;
• nudności, wymioty, biegunka;
• ból głowy, gorączka.

Klinika:

Główne okresy zakażenia rotawirusem:

• okres inkubacji trwa 1-2 dni;
• ostry okres trwa 3-7 dni;
• powrót do zdrowia trwa 4-5 dni.

Choroba charakteryzuje się ostrym początkiem, ale obecność okresu prodromalnego jest możliwa (około 2 dni). Może powodować niedyspozycję, ogólne osłabienie, ból głowy, zwiększone zmęczenie, utratę apetytu, nieprzyjemne odczucia i dudnienie w żołądku. Ponadto możliwy jest rozwój objawów choroby górnych dróg oddechowych: przekrwienie błony śluzowej nosa, ból gardła, łatwy kaszel.

Ogólny obraz kliniczny obejmuje zespoły zatrucia, zapalenie żołądka i jelit oraz uszkodzenia górnych dróg oddechowych.

Objawy zespołu zapalenia żołądka i jelit obejmują: głośne dudnienie w brzuchu, ból, głównie w górnej części brzucha, nudności, wymioty, biegunka. Biegunka z zakażeniem rotawirusem ma wodnistą spienioną konsystencję i jest żółta lub zielonkawożółta.

Objawy syndromu zatrucia: zmęczenie, osłabienie, ból głowy. W ciężkich przypadkach: zawroty głowy, omdlenia.

Klęska górnych dróg oddechowych charakteryzuje się katarem, przekrwieniem nosa, bólem gardła, kaszlem. Zev, gdy ma jasny czerwony kolor.

Powikłania i śmiertelność

Ciężkie postacie choroby, którym towarzyszy silne odwodnienie, charakteryzują się rozwojem niewydolności sercowo-naczyniowej, a nawet śmierci (w 2-3% przypadków). Po infekcji powstaje niestabilna odporność, która z czasem słabnie, więc możliwa jest ponowna infekcja.

Diagnoza zakażenia rotawirusem

Rozpoznanie zakażenia rotawirusem jest możliwe tylko w przypadku wykrycia rotawirusa u ludzi przy użyciu laboratoryjnych metod diagnostycznych, takich jak reakcja łańcuchowa polimerazy PCR, RPHA - pasywna reakcja hemaglutynacji, CSC - wiązanie dopełniacza, immunofluorescencja i wiele innych.

Całkowita morfologia pokaże leukocytozę z neutrofilowym przesunięciem w lewo, zwiększoną ESR - w ostrym okresie. Okres powrotu do zdrowia charakteryzuje się normalizacją obrazu krwi. Analiza moczu pokaże krwinki białkowe, leukocytowe i czerwone, cylindry szkliste w małych ilościach.

Zakażenie rotawirusem - leczenie grypy jelitowej u dorosłych i dzieci

Leczenie jest objawowe, ponieważ nie ma specyficznych leków antyirotawirusowych do zwalczania rotawirusa.

Zasady leczenia zakażenia rotawirusem:

1. Izolacja pacjenta z zakażeniem rotawirusem
2. Walcz z odwodnieniem. Pożądane jest stosowanie do tego specjalnych roztworów soli, na przykład rehydronu, soli fizjologicznej. Stosuje się je w leczeniu pacjenta w szpitalu, ale w domu można przygotować sól fizjologiczną, aby przywrócić normalny stan kwasowo-zasadowy: 1 łyżeczka do 1 litra wody. Zaleca się picie dużej ilości wody mineralnej.
3. Walka z temperaturą musi rozpoczynać się w temperaturze 38, 5 i wyższej. Jednocześnie, w zależności od rodzaju gorączki, konieczne jest użycie metod fizycznych w celu obniżenia temperatury, na przykład pocieranie ciała wodą i chemikaliów - przyjmowanie określonych leków, u dzieci lepiej jest używać świec.
4. Akceptacja preparatów enzymatycznych, środków adsorbujących i ściągających (węgiel aktywny, polisorb), preparatów bakterii mlekowych.
5. Zabrania się przyjmowania środków przeciwbólowych na ból brzucha.

Wskazania do skierowania do szpitala na zakażenie rotawirusem:

• postępujące pogorszenie, przedłużająca się biegunka;
• pojawienie się nowych objawów.

Dieta na zakażenie rotawirusem:

Dieta obejmuje unikanie mleka i produktów mlecznych, w tym produktów mlecznych. Wskazane jest włączenie do diety bulionu z kurczaka lub owsianki ryżowej, gotowanej w wodzie bez dodawania oleju. Konieczne jest spożywanie małych porcji z przerwami. Zaleca się ograniczenie spożycia żywności bogatej w węglowodany.

Zapobieganie zakażeniu rotawirusem

Kluczowe środki zapobiegające zakażeniu rotawirusem obejmują:

• Zapobieganie przedostawaniu się wirusa do organizmu, w tym izolowanie chorego, regularne mycie rąk, spożywanie sprawdzonych i wysokiej jakości produktów, używanie wody destylowanej, mycie warzyw i owoców;
• kontrola sanitarna obiektów gastronomicznych i produktów w sklepach, na rynkach.

Przed użyciem informacji dostarczonych przez stronę medportal.org przeczytaj warunki umowy z użytkownikiem.

Umowa użytkownika

Strona medportal.org świadczy usługi na warunkach opisanych w tym dokumencie. Rozpoczynając korzystanie z witryny, użytkownik potwierdza, że ​​zapoznał się z warunkami niniejszej Umowy z użytkownikiem przed rozpoczęciem korzystania z witryny i akceptuje wszystkie warunki niniejszej Umowy w całości. Nie korzystaj z witryny, jeśli nie zgadzasz się z tymi warunkami.

Opis usługi

Wszystkie informacje zamieszczone na stronie mają charakter wyłącznie informacyjny, informacje pochodzące ze źródeł publicznych są referencyjne i nie stanowią reklamy. Witryna medportal.org świadczy usługi, które umożliwiają użytkownikowi wyszukiwanie leków w danych uzyskanych z aptek w ramach umowy między aptekami a medportal.org. Aby ułatwić korzystanie z danych na temat narkotyków, suplementy diety są usystematyzowane i wprowadzane do jednej pisowni.

Witryna medportal.org oferuje usługi, które umożliwiają użytkownikowi wyszukiwanie klinik i innych informacji medycznych.

Zastrzeżenie

Informacje umieszczone w wynikach wyszukiwania nie są ofertą publiczną. Administracja witryny medportal.org nie gwarantuje dokładności, kompletności i (lub) istotności wyświetlanych danych. Administracja witryny medportal.org nie ponosi odpowiedzialności za szkody lub szkody poniesione przez użytkownika w związku z dostępem lub niemożnością uzyskania dostępu do witryny lub z użycia lub niemożności korzystania z tej witryny.

Akceptując warunki niniejszej umowy, w pełni rozumiesz i zgadzasz się, że:

Informacje na stronie są tylko w celach informacyjnych.

Administracja strony medportal.org nie gwarantuje braku błędów i rozbieżności w odniesieniu do zadeklarowanej na stronie i rzeczywistej dostępności towarów i cen towarów w aptece.

Użytkownik zobowiązuje się do wyjaśnienia informacji będących przedmiotem zainteresowania przez telefon do apteki lub skorzystania z informacji podanych według własnego uznania.

Administracja strony medportal.org nie gwarantuje braku błędów i rozbieżności dotyczących harmonogramu pracy klinik, ich danych kontaktowych - numerów telefonów i adresów.

Ani administracja witryny medportal.org, ani żadna inna strona zaangażowana w proces dostarczania informacji nie ponosi odpowiedzialności za jakiekolwiek szkody lub szkody, które możesz ponieść w wyniku pełnego polegania na informacjach zawartych na tej stronie.

Administracja strony medportal.org zobowiązuje się do podjęcia dalszych wysiłków w celu zminimalizowania rozbieżności i błędów w dostarczonych informacjach.

Administracja witryny medportal.org nie gwarantuje braku awarii technicznych, w tym w odniesieniu do działania oprogramowania. Administracja strony medportal.org zobowiązuje się jak najszybciej dołożyć wszelkich starań, aby wyeliminować wszelkie błędy i błędy w przypadku ich wystąpienia.

Użytkownik jest ostrzegany, że administrowanie witryną medportal.org nie jest odpowiedzialne za odwiedzanie i korzystanie z zewnętrznych zasobów, do których linki mogą być zawarte na stronie, nie zapewnia zgody na ich treść i nie ponosi odpowiedzialności za ich dostępność.

Administracja strony medportal.org zastrzega sobie prawo do zawieszenia witryny, częściowej lub całkowitej zmiany jej treści, wprowadzenia zmian w Umowie użytkownika. Takie zmiany są dokonywane wyłącznie według uznania Administracji bez uprzedniego powiadomienia Użytkownika.

Potwierdzasz, że zapoznałeś się z warunkami niniejszej Umowy użytkownika i akceptujesz wszystkie warunki niniejszej Umowy w całości.

Informacje reklamowe, na których miejscu w witrynie znajduje się odpowiednia umowa z reklamodawcą, są oznaczone jako „reklama”.

Zakażenie rotawirusem

Zakażenie rotawirusem (rotawirusowe zapalenie żołądka i jelit) jest ostrą chorobą zakaźną wywoływaną przez rotawirusy, charakteryzującą się objawami ogólnego zatrucia i uszkodzenia przewodu pokarmowego wraz z rozwojem zapalenia żołądka i jelit.

Kod ICD-10
A08.0. Rotawirusowe zapalenie jelit.

Etiologia (przyczyny) zakażenia rotawirusem

Czynnik sprawczy jest członkiem rodziny Reoviridae, rodzaju Rotawirusa (rotawirusa). Nazwa opiera się na podobieństwie morfologicznym rotawirusów z kołem (z łacińskiego „rota” - „wheel”). Pod mikroskopem elektronowym cząsteczki wirusowe wyglądają jak koła z szeroką piastą, krótkimi szprychami i wyraźnie zdefiniowaną cienką krawędzią. Wirion rotawirusowy o średnicy 65–75 nm składa się z centrum gęstego elektronu (rdzenia) i dwóch powłok peptydowych: zewnętrznego i wewnętrznego kapsydu. Rdzeń 38–40 nm zawiera wewnętrzne białka i materiał genetyczny reprezentowany przez dwuniciowy RNA. Genom rotawirusów u ludzi i zwierząt składa się z 11 fragmentów, co jest prawdopodobnie przyczyną różnorodności antygenowej rotawirusów. Replikacja rotawirusów w ludzkim ciele zachodzi wyłącznie w komórkach nabłonkowych jelita cienkiego.

Zakażenie rotawirusem, widok w mikroskopie elektronowym

Cztery główne antygeny znaleziono w rotawirusie; głównym jest antygen grupowy, białko wewnętrznego kapsydu. Biorąc pod uwagę wszystkie antygeny specyficzne dla grupy, rotawirusy są podzielone na siedem grup: A, B, C, D, E, F, G. Większość rotawirusów ludzkich i zwierzęcych należy do grupy A, w której wyróżniają się podgrupy (I i II) i serotypy. Podgrupa II obejmuje do 70–80% szczepów wyizolowanych od pacjentów. Istnieją dowody na możliwą korelację niektórych serotypów z nasileniem biegunki.

Rotawirusy są odporne na czynniki środowiskowe: w wodzie pitnej, otwartych zbiornikach wodnych i ściekach utrzymują się przez kilka miesięcy, w przypadku warzyw - 25–30 dni, w przypadku bawełny, wełny - przez 15–45 dni. Rotawirusy nie są niszczone przez wielokrotne zamrażanie, pod działaniem roztworów dezynfekujących, eteru, chloroformu, ultradźwięków, ale giną po zagotowaniu, traktowane roztworami o pH większym niż 10 lub mniejszym niż 2. Optymalne warunki dla wirusów: temperatura 4 ° C i wysoka (> 90%) lub niski (Autor: Choroby zakaźne: przywództwo krajowe, pod red. ND Yuschuk, Yu. Ya. Vengerov. 2009

Rozpoznanie zakażenia rotawirusem

Potwierdź
Zastępca szefa
Główny epidemiolog
Departament Ministerstwa Zdrowia ZSRR
G.G.NONISHCHENKO

7 marca 1989 N 15-6 / 6

Zakażenie rotawirusem

(ZALECENIA METODYCZNE)

Instytut Poliomyelitis i wirusowego zapalenia mózgu, Akademia Nauk Medycznych ZSRR.

Instytut Badawczy Epidemiologii Ministerstwa Zdrowia ZSRR;

Instytut Badawczy Epidemiologii i Mikrobiologii. G.N. Gabrievskogo Ministerstwo Zdrowia RFSRR;

Naukowe Stowarzyszenie Produkcji „Rostepidkompleks”;

All-Union Instytut Badań Naukowych Dezynfekcji i Sterylizacji Ministerstwa Zdrowia ZSRR.

Wytyczne są przeznaczone dla praktyków i badaczy organów i instytucji zajmujących się zdrowiem.

Rotawirus ludzki należy do grupy wirusów zwierzęcych podobnych do siebie, które oprócz tego obejmują wirus biegunki nebraska cielęcej (NCDV), wirus epizootycznej biegunki młodych myszy (EDJM), wirus małpy (SA-II), wirus pochodzący z treści jelitowej owiec i bydło (0), a także patogeny świń biegunkowych, źrebiąt, szczeniąt i innych zwierząt. Wszystkie te wirusy mają ten sam rozmiar i kształt i są blisko siebie pod względem antygenowym.

Zwierzęta rotawirusowe dobrze się rozmnażają w hodowli tkankowej, dlatego izolowano je i badano przed ludzkim rotawirusem. Rotawirusy cieląt i małp, ze względu na ich antygenową bliskość do ludzkiego rotawirusa, wykorzystano do ustalenia jego etiologicznej roli w ostrym zapaleniu żołądka i jelit i stosowano dotychczas w ich diagnostyce serologicznej i uzyskiwaniu immunoreagentów.

Ludzki rotawirus wykryto za pomocą mikroskopii elektronowej w komórkach nabłonka dwunastnicy oraz w ekstraktach kału typowych pacjentów, gdzie często jest on zawarty w bardzo znacznych stężeniach (do 10 cząstek w 1,0 g kału). Wirion rotawirusowy jest dwu kapsydem (tj. Pokrytym dwuwarstwową osłonką białkową) kulistą cząstką o średnicy 70 - 75 nm, zawiera kwas rybonukleinowy - RNA (11 dwuniciowych segmentów), ma gęstość pływającą w chlorku cezu 1,36 g / cu. cm ze współczynnikiem sedymentacji 500 - 530 S

Zgodnie z dostępnymi cechami ludzki rotawirus wraz z wymienionymi powyżej wirusami zwierzęcymi został sklasyfikowany jako rodzaj Rotawirusa z rodziny Reoviridae. Nazwa „rotawirus” pochodzi od łacińskiego rota - koła, które cząsteczka wirusa przypomina mikroskopowe preparaty elektronowe.

Zgodnie ze swoistością antygenową wykrytą w teście ELISA, rotawirusy dzielą się na dwie podgrupy (oznaczone cyframi rzymskimi - I i II) oraz przez swoistość wykrytą w reakcji neutralizacji przez 4 (i prawdopodobnie więcej) serotypów (oznaczonych cyframi arabskimi - 1 2, 3, 4). Swoistość podgrup niektórych rotawirusów jest określona przez główne białko wewnętrznego kapsydu, a ich swoistość serotypowa jest określona przez glikoproteinę zewnętrznego kapsydu. Ostatnio odkryto rotawirusy nowego typu (tak zwane pararotawirusy), które nie mają antygenu specyficznego dla grupy.

Zakażenie rotawirusem jest powszechne. Informacje o jego identyfikacji zostały opublikowane w Australii, Wielkiej Brytanii, NRD, Kanadzie, Indiach, Hiszpanii, USA, Francji, Japonii i wielu innych krajach. W Związku Radzieckim choroby rotawirusowego zapalenia żołądka i jelit zarejestrowano wśród dzieci i dorosłych w wielu regionach RFSRR, Zakaukazia, Ukrainy, państw bałtyckich, Azji Środkowej i innych terytoriów. Wśród dzieci i dorosłych zakażenie rotawirusem może przejawiać się w postaci sporadycznych przypadków, lokalnych chorób grupowych i ognisk masowych, obejmujących różne grupy ludności na dużych obszarach. Wśród hospitalizowanych pacjentów z ostrymi zakażeniami jelitowymi odsetek dorosłych z rotawirusowym zapaleniem żołądka i jelit wynosi średnio 10–15%, dzieci 15–27% lub więcej. Dane literaturowe dotyczące izolacji rotawirusa (antygenu) u zdrowych dzieci i dorosłych są bardzo sprzeczne: od 0–0,5 do 42% u dzieci i od 0% do 7% lub więcej u dorosłych. Zakażenie rotawirusem jest rejestrowane przez cały rok. Jednak ponad 70% pacjentów wykrywa się w zimnej porze roku. W okresie zimowo-wiosennym, większość ognisk zakażenia rotawirusem wśród populacji, jak również choroby grupowe wśród noworodków i wcześniaków, dzieci grup zorganizowanych, osób starszych, są również rejestrowane. Nie było wyraźnych różnic w rozmieszczeniu zakażeń rotawirusowych (zarówno dzieci, jak i dorosłych) według płci.

Źródłem zakażenia w ostrych zakażeniach jelitowych o etiologii rotawirusowej są zakażeni dorośli i dzieci - pacjenci z jawną postacią zakażenia lub bezobjawowym wydzielaniem rotawirusów z kałem. Jednocześnie dzieci pierwszego roku życia są często zakażane przez matki zakażone rotawirusem oraz starsze dzieci i dorośli od dzieci zorganizowanych grup dziecięcych. Zakażenie ludzi od zwierząt nie jest udowodnione, chociaż możliwość tego nie jest wykluczona. Obecnie rotawirusy różnych serotypów występują w odchodach prawie 50 gatunków zwierząt i ptaków z wyraźnymi oznakami biegunki i bez nich.

Rotawirusy u pacjentów i osób bez objawów klinicznych choroby występują obecnie tylko w kale. Pacjenci wydzielają rotawirusy do środowiska, począwszy od pierwszego dnia choroby, podczas gdy u wszystkich pacjentów wykryto maksymalną ilość patogenu w kale (do 10 - 10 cząstek wirusowych na 1 g) w ciągu pierwszych pięciu dni choroby, co określa największe ryzyko epidemiologiczne pacjentów dla innych ten okres choroby. W ciągu następnych 6 do 10 dni uwalnianie rotawirusów z odchodami pacjentów gwałtownie spada w miarę normalizacji stolca. Średni czas wydalania rotawirusów przez pacjentów wynosi 7–8 dni, ale u niektórych pacjentów okres ten może trwać do 20–30 dni. Osoby bez objawów klinicznych choroby mogą długotrwale uwalniać rotawirusy z kałem - do kilku miesięcy lub dłużej (okres obserwacji).

Głównym mechanizmem przenoszenia rotawirusów jest kałowo-doustny, który realizowany jest za pomocą wody, żywności i domowych dróg przesyłowych. W przypadku sporadycznych i miejscowych chorób grupowych zakażenie rotawirusami następuje głównie za pomocą środków gospodarstwa domowego. Przyczynia się to do bardzo niskiej patogennej dawki rotawirusów (w obrębie 10 cząstek wirusowych). Ustalono, że w różnych miejscach środowiskowych rotawirusy zachowują żywotność od 10–15 dni (w zależności od temperatury i wilgotności) do jednego miesiąca; w kale od kilku tygodni do siedmiu miesięcy.

Obecnie ogniska zakażenia rotawirusowego wodą i żywnością odnotowuje się w naszym kraju i za granicą. Rotawirusy znajdują się w wodzie rzek, jezior, mórz, wód gruntowych, wody z kranu, niektórych produktów spożywczych (mleko itp.).

Można przypuszczać, że w niektórych przypadkach kroplówki, kurz i inne szlaki rotawirusa mogą zostać wdrożone.

Rotawirusy są również znane jako jeden z głównych czynników etiologicznych w ogniskach szpitalnych (szpitalnych) ostrego zapalenia żołądka i jelit. W szpitalach o różnych profilach do 50–60% chorych dzieci może zostać zarażonych. Istnieją przypadki ognisk w domach położniczych. Często dotyka dzieci, które są sztucznie karmione, cierpią na ostre i przewlekłe choroby, z różnymi rodzajami niedoboru odporności.

Odporność na podatność. Ludzie we wszystkich grupach wiekowych są podatni na rotawirusy. Największą podatność obserwuje się u dzieci w wieku 6 miesięcy. do 2 lat. Przeciwciała przeciwko rotawirusom są wykrywane u 50–60% dzieci w pierwszym roku życia, w wieku powyżej 3 lat - więcej niż u 90% i prawie u wszystkich dorosłych. Jednakże, zgodnie z literaturą, obecność przeciwciał w surowicy wskazuje zasadniczo tylko na spotkanie ludzkiego ciała z rotawirusem, a nie na obecność odporności, ponieważ nawet przy znacznym poziomie przeciwciał humoralnych możliwe są powtarzające się choroby. Odporność na zakażenie rotawirusem nie jest w pełni poznana. Uważa się, że oporność na zakażenie wynika głównie z lokalnej odporności komórek nabłonka jelita cienkiego, co jest związane z obecnością przeciwciał wydzielniczych klasy IgA. Przeciwciała te znajdują się również w mleku karmiącej matki i, jak się wydaje, służą jako czynnik w biernej immunizacji noworodków, które przy braku objawów klinicznych choroby z kałem, mogą uwalniać znaczne ilości rotawirusów do środowiska i infekować wcześniaki i dzieci z niekorzystnym tłem przedchorobowym. Rotawirusy różnych serotypów nie tworzą odporności krzyżowej, a zatem to samo dziecko lub dorosły może mieć powtarzające się choroby z powodu innych serotypów wirusa. Zauważono również niestabilny charakter odporności u pacjentów z rotawirusowym zapaleniem żołądka i jelit, powtarzające się choroby są często rejestrowane 1-1,5 roku po zakażeniu.

Cechy procesu epidemii zakażenia rotawirusem:

- wszechobecność dystrybucji terytorialnej;

- surowa sezonowość zimowa lub zimowo-wiosenna;

- niska zakaźna dawka patogenu i wysokie ogniska w grupach zorganizowanych;

- szkody dla osób we wszystkich grupach wiekowych;

- wysoki odsetek przypadków wśród dzieci w wieku poniżej 2 lat z maksymalnym wykryciem chorób wśród dzieci drugiej połowy życia;

- wysoka aktywność wody i krajowych dróg przesyłu;

- miejsce ognisk domowych, głównie ograniczone do rodziny;

- możliwość bezobjawowej izolacji rotawirusów wśród dzieci i dorosłych;

- możliwość zakażeń szpitalnych z udziałem personelu medycznego i rodziców chorych dzieci.

Obraz kliniczny zakażenia rotawirusem ma wiele wspólnego z objawami klinicznymi ostrych chorób jelit o różnej etiologii, co utrudnia rozpoznanie tej choroby. Istnieje jednak szereg charakterystycznych różnic, które umożliwiają terminowe podejrzenie tej choroby i prawidłowe przeprowadzenie środków przeciw epidemii i terapii.

Okres inkubacji jest krótki i trwa od 15 godzin do 3 - 5 dni, ale najczęściej - 1 - 3 dni.

Większość pacjentów ma ostry początek choroby, gdy cały kompleks objawów rozwija się w pierwszych dniach choroby. U małych dzieci możliwy jest podostry początek, charakteryzujący się pojawieniem się w pierwszych dniach choroby 1 lub 2 objawów i dodaniem reszty od 2 do 3 dni choroby. Najbardziej patognomoniczna dla zakażenia rotawirusem jest uszkodzenie przewodu pokarmowego, które u 60–70% pacjentów łączy się z rozwojem objawów uszkodzenia dróg oddechowych. Czasami objawy nieżytowe mogą poprzedzać 3-4 dniowe zaburzenia czynności jelit. Zespół oddechowy charakteryzuje się umiarkowanym przekrwieniem i ziarnistością gardła, podniebienia miękkiego i łuków podniebiennych, przekrwieniem nosa, kaszlem, które w przeciwieństwie do ARVI są mniej wyraźne, nie mają tendencji do wzrostu i są krótkotrwałe (4-5 dni). Biegunka występuje u 95–97% pacjentów. W przypadku zakażenia rotawirusem charakteryzuje się rozwojem zapalenia żołądka i jelit, mniejszym zapaleniem jelit. Krzesło jest zwykle płynne, wodniste, pieniste, słabo zabarwione, bez zanieczyszczeń lub z niewielką ilością śluzu. U małych dzieci przeważa wodnista biegunka, co tłumaczy częstszy rozwój egzsykozy w tej grupie wiekowej. Częstotliwość stolców średnio nie przekracza 4 do 5 razy dziennie, ale u młodszych dzieci może sięgać od 15 do 20 razy. Czas trwania biegunki u dorosłych i starszych dzieci wynosi 3 - 7 dni, u niemowląt często trwa do 10 - 14 dni. Wymioty są głównym objawem i występują u 80% pacjentów z zakażeniem rotawirusem. Najczęściej występuje jednocześnie z biegunką lub poprzedza ją. Wymioty są często powtarzane, ale krótkotrwałe (1-2 dni). Powtarzające się i niekontrolowane wymioty w przypadku tej infekcji nie są typowe i często wskazują na mieszane zakażenie. Temperatura z reguły nie przekracza 38,5 - 39 ° C i jest normalizowana przez 3-4 dni choroby. Najbardziej typowymi objawami zatrucia ogólnego są osłabienie, letarg, osłabienie, bóle głowy, zawroty głowy. Nasilenie choroby jest determinowane przez rozwój izotonicznej eksysozy, I - II stopień, rzadziej III stopień, który jest częstszy u niemowląt. Jednocześnie straty elektrolitów (Na i K) są małe, co należy wziąć pod uwagę podczas prowadzenia terapii nawadniającej.

4. Diagnoza i diagnostyka różnicowa

Obiektywne badanie pacjentów wykazało letarg, przekrwienie spojówek i zastrzyk naczyniowy twardówki. Język umiarkowanie powleczony, suchy. Brzuch jest miękki, umiarkowanie bolesny przy badaniu dotykowym w obszarze jelita cienkiego. Wątroba i śledziona nie są powiększone. Ślepa i esowata okrężnica miękka, bezbolesna. Ciśnienie krwi jest zmniejszone. Puls nie jest zatłoczony, ale raczej występuje tendencja do względnej bradykardii. Nie ma zjawisk oponowych. W krwi obwodowej na samym początku choroby może wystąpić umiarkowana leukocytoza, od 2 do 3 dni choroby występuje tendencja do leukopenii ze spadkiem liczby zastojów leukocytów i wzrost liczby limfocytów i monocytów, ESR nie jest przyspieszany.

W analizie laboratoryjnej moczu występuje niewielka albuminuria, szybko przemijająca mikrohematuria, niewielki wzrost liczby leukocytów i możliwy jest pojawienie się cylindrów szklistych. Zmiany w moczu zależą od ciężkości choroby i odwodnienia.

Badanie mikroskopowe kału liczba leukocytów nie przekracza 10-15 w polu widzenia, jest domieszka śluzu.

Rektomoskopowo możliwe jest ujawnienie umiarkowanego przekrwienia błony śluzowej odbytnicy i esicy bez zmian ogniskowych.

Rotawirusowe zapalenie żołądka i jelit jest podzielone przez nasilenie, które zależy od intensywności biegunki i spowodowanego nią odwodnienia, a także od ciężkości ogólnego zatrucia. Istnieją trzy stopnie nasilenia rotawirusowego zapalenia żołądka i jelit: łagodne, umiarkowanie ciężkie i rzadziej ciężkie.

Diagnostyka różnicowa prowadzona jest w przypadku salmonellozy, cholery, czerwonki, toksykokinetycznych zakażeń pokarmowych wywołanych przez warunkowo patogenne mikroorganizmy, persiniozę i inne wirusowe zapalenie żołądka i jelit.

Postać salmonellozy w przewodzie pokarmowym charakteryzuje się jednoczesną chorobą osób, które jadły produkty niskiej jakości. Zazwyczaj ostry początek: hipertermia, ciężkie dreszcze, wymioty, silny ból brzucha, obfity cuchnący stolec, który zachowuje charakter kału, leukocytoza neutrofilowa z przesunięciem formuły leukocytów w lewo. W przypadku salmonellozy nie ma zmian w błonie śluzowej gardła, wątroba jest zwykle powiększona. Izolacja patogenu w badaniu bakteriologicznym kału, wymiocin lub płukania żołądka rozwiązuje diagnozę.

Według wielu klinicznych objawów masy i szybkości choroby, rotawirusowe zapalenie żołądka i jelit może przypominać cholerę. Lecz zakażenie rotawirusem wyróżnia się łagodniejszym przebiegiem, w szczególności przez to, że nie rozwija się stan algidów, a także obecność typowych zmian w błonie śluzowej jamy ustnej i gardła.

Najważniejsze są wyniki badań bakteriologicznych w przypadku wykrycia Vibrio cholerae. Podobna sytuacja występuje w przypadku infekcji NAG.

Bakteryjna dyzenteria charakteryzuje się ostrym bólem brzucha, częstym, czasem fałszywym, ponaglającym, stolcem zmieszanym ze śluzem i krwią, wyraźnym zapaleniem esicy, ciągłą reakcją gorączkową, zmianami patologicznymi w dystalnej części okrężnicy według rektoskopii. Wszystkie te oznaki, jak również wyniki badań bakteriologicznych, sprawiają, że stosunkowo łatwo jest przeprowadzić diagnostykę różnicową dla postaci zapalenia jelita grubego. W przypadku postaci czerwonek żołądkowo-jelitowych wartość wyników badań bakteriologicznych gwałtownie wzrasta.

Szczególnie trudna jest diagnostyka różnicowa rotawirusowego zapalenia żołądka i jelit oraz zatrucia pokarmowego wywołanego przez oportunistyczne patogeny, biorąc pod uwagę niedostateczną wiedzę na temat obrazu klinicznego tych chorób. Zgodnie z doniosłością diagnostyczną badań laboratoryjnych, pierwszeństwo powinny mieć pozytywne wyniki badań wirusologicznych i immunologicznych potwierdzających charakter rotawirusa choroby, a nie wykrywanie warunkowo patogennych bakterii w stolcu pacjenta.

W przypadku perinozy w przewodzie pokarmowym charakterystyczny jest bardziej stopniowy początek, wraz z zapaleniem żołądka i jelit, bólami mięśni i stawów; wątroba jest zwykle powiększona; stolec jest lepki ze względu na znaczną domieszkę śluzu, a czasami krew jest możliwa. Leukocytozę odnotowuje się we krwi; Zwiększono ESR.

Zespół zapalenia żołądka i jelit może być widoczny w niektórych chorobach wirusowych. Obejmują one zakażenie adenowirusowe, które oprócz zmian jelitowych charakteryzuje się zapaleniem spojówek, nieżytem nosa, zapaleniem gardła, zapaleniem migdałków, zapaleniem oskrzeli, zapaleniem płuc, wzrostem szyjnych węzłów chłonnych, wątroby, śledziony, przedłużoną gorączką.

Z zapalenia jelit i zapalenia żołądka i jelit wywołanego przez enterowirusy Koksaki i ECHO, rotawirusowe zapalenie żołądka i jelit charakteryzuje się monosyndromicznym obrazem klinicznym, w którym uszkodzenie jelit zajmuje wiodące miejsce. W przeciwieństwie do tego, podczas wybuchów epidemii natury enterowirusowej, odnotowuje się obecność różnych postaci klinicznych choroby, „wielopostaciowość” obrazu klinicznego, w której znaczące znaczenie mogą mieć objawy uszkodzenia błon mózgu, skóry i górnych dróg oddechowych.

Diagnostyka różnicowa zakażenia rotawirusem z kolibakteriozą u dzieci jest najtrudniejsza i może opierać się na następujących kryteriach:

- większy ostry początek zakażenia rotawirusem w porównaniu z kolibakteriozą, zwłaszcza spowodowany przez enteropatogenną kolibakteriozę;

- szybsza regeneracja po infekcji rotawirusem, nawet u małych dzieci;

- większa częstość zespołu oddechowego w przypadku zakażenia rotawirusem, ale jego mniejsza nasilenie i czas trwania.

Największą trudnością jest diagnoza mieszanych zakażeń bakteryjnych rotawirusami, których udział w zimowych porach roku jest dość duży (7-10% wszystkich OKI).

Cechą kliniczną zakażeń mieszanych jest obecność kompleksów objawowych charakterystycznych dla obu połączonych infekcji: zwiększenie objawów zatrucia, pojawienie się objawów zmian zapalnych w błonie śluzowej jelita cienkiego i grubego oraz wolniejsza regeneracja.

Hospitalizacja dzieci i dorosłych z podejrzeniem OCI spowodowanych przez rotawirusy przeprowadzana jest zgodnie ze wskazaniami klinicznymi (ciężkość choroby) i epidemiologicznymi (obecność słabych dzieci w środowisku pacjenta, dzieci pierwszego roku życia, uczęszczających do placówek dla dzieci w wieku przedszkolnym, pracowników przemysłu spożywczego i osób z nimi utożsamionych) niezdolność do przestrzegania przepisów anty-epidemicznych w domu itp.). Dzieci poniżej pierwszego roku życia z ciężkimi objawami OCI są hospitalizowane w pierwszej kolejności. Obowiązkowa jest osobna hospitalizacja pacjentów z podejrzeniem rotawirusowego zapalenia żołądka i jelit oraz ostrych zakażeń jelitowych o innej etiologii (oddzielne oddziały, pudełka). Należy przestrzegać zasady „jednorazowego napełniania” komór (skrzynek).

Leczenie pacjentów z rotawirusowym zapaleniem żołądka i jelit, z uwzględnieniem istniejących pomysłów na patogenezę tej choroby, obejmuje oszczędzający reżim i kompensację za naruszenie stanu funkcjonalnego jelita, przywrócenie równowagi hydroelektrolitów i detoksykację organizmu.

W czasie ostrego okresu choroby przepisywana jest dieta 4-B, w której występuje ostre ograniczenie węglowodanów (do 200 g) i zwiększenie ilości białka (do 150 g) z niewielkim spadkiem zawartości kalorii (2400 kalorii). Ilość cukru jest ograniczona do 40 g dziennie, warzyw i owoców. Mleko jest wykluczone. Sól nie jest ograniczona.

Przedstawiono cel takich domowych preparatów multienzymatycznych trawiennych, jak i solizim, somilaza, które w leczeniu pacjentów z rotawirusowym zapaleniem żołądka i jelit nie są gorsze od importu (panzinorm, trawienny, festal, trienzyme itp.).

Stopień odwodnienia organizmu jest koniecznie oceniany i prowadzona jest terapia mająca na celu uzupełnienie nadmiernych strat wody i soli. W przypadku odwodnienia I - II stopień według V.I. Roztwory glukozowo-elektrolitowe podaje się doustnie Pokrovsky'emu (glukozolanowi rehydronowemu), biorąc pod uwagę utratę płynów i elektrolitów, a po odwodnieniu III stopnia konieczne jest rozpoczęcie leczenia dożylnym podaniem roztworów soli wodnej (trisol, quartosol, chlosol, acesol) itp.

Taktyka wprowadzania rozwiązań odbywa się zgodnie z zasadami terapii nawadniającej.

Aby ustabilizować normalne krążenie krwi i detoksykację, można wprowadzić roztwory koloidalne (gemodez, polyglukin, reopolyglukine).

Należy podkreślić, że przepisanie leków przeciwbakteryjnych, jeśli nie ma jednoczesnego zakażenia bakteryjnego, nie jest uzasadnione.

Wskazane jest stosowanie leków adsorbujących i ściągających.

Leczenie infekcji wirusowej nie jest obecnie rozwijane.

Wyciąg rekonwalescencji przeprowadzany jest po stabilnej (w ciągu 2 - 3 dni) normalizacji stolca i zaniku wszystkich innych objawów klinicznych choroby podstawowej, przy braku powikłań.

Dzieci uczęszczające do placówek przedszkolnych, pracowników placówek spożywczych i osób z nimi związanych otrzymują jednorazowe badanie wirusologiczne po zniknięciu objawów klinicznych.

Pozostałe kontyngenty pacjentów nie podlegają obowiązkowemu badaniu laboratoryjnemu.

6. Diagnostyka laboratoryjna

Diagnostyka laboratoryjna rotawirusowego zapalenia żołądka i jelit nie jest obecnie trudna. Szybki rozwój zespołu klinicznego i krótkoterminowy pobyt w szpitalu narzucają potrzebę stosowania szybkich metod określania etiologii choroby. Większość laboratoryjnych metod diagnostycznych zalecanych w tym podręczniku pozwala wykryć rotawirusy podczas pierwszego dnia. Wybór metody w każdym przypadku zależy od wyposażenia technicznego laboratorium, a także dostępności odpowiednich odczynników.

Tradycyjne metody wykrywania zmian serologicznych w surowicy pacjentów (reakcja neutralizacji, hamowanie hemaglutynacji i wiązanie dopełniacza) są ważne w retrospektywnej analizie choroby. Dlatego, w celu wczesnego rozpoznania serologicznego zakażenia rotawirusem, zaleca się oznaczenie przeciwciał klasy IgM.

Celem badania wirusologicznego chorego jest zwykle kał. Obecność i rozmieszczenie rotawirusów w środowisku jest wykrywane poprzez badanie próbek gleby, żywności i wody (ścieki, woda z naturalnych i sztucznych zbiorników, woda pitna).

6.1. Wykrywanie rotawirusów w materiale klinicznym

oraz w próbkach środowiskowych

6.1.1. Przygotowanie próbki do testów; pobieranie próbek

Podczas pobierania próbek do badań wirusologicznych spełnione są pewne ogólne wymagania, podejmujące środki w celu ochrony materiału przed zanieczyszczeniem. Próbki są pobierane wyłącznie w sterylnych naczyniach z gęstym gumowym korkiem, wzmocnionym tynkiem klejącym. Transportować próbki w pojemnikach z lodem lub czynnikiem chłodniczym.

6.1.2. Przygotowanie do zawieszenia, wyjaśnienie,

czyszczenie próbek, usuwanie flory bakteryjnej

Przygotowanie próbek kału do badania rotawirusa obejmuje przygotowanie 10% zawiesiny, homogenizację, wirowanie przy 3000 rpm. w ciągu 30 minut, aby usunąć florę bakteryjną. Podczas badania obiektów środowiska i produktów spożywczych przeprowadzana jest wstępna koncentracja badanego materiału.

6.1.3. Stężenie cząstek wirusa w próbkach wody

Stężenie rotawirusów jest ważnym warunkiem zwiększenia skuteczności ich wykrywania w zbiornikach wodnych środowiska.

Metoda zatężania rotawirusów za pomocą chromatografii adsorpcyjnej na porowatej krzemionce - szkle makroporowatym (MPS) - jest prosta i wygodna, przy użyciu objętości wody od 0,1 do 10 litrów. Gdy próbka przechodzi przez warstwę MPS, wirus jest sorbowany na powierzchni szkła. Do elucji wirusa przy użyciu roztworów, które mogą powodować desorpcję wirusa. Wirus usuwa się ze szkła za pomocą małej objętości roztworu, co prowadzi do stężenia dziesiątek do setek razy w porównaniu z oryginalną próbką.

Aby poprawić właściwości adsorpcyjne, domowe preparaty szkła marki MPS-1000 VGH traktuje się w następujący sposób: przygotowuje się mieszaninę (1: 1) 3% HO i 6 M HCl. Szkło jest napełniane przygotowaną mieszaniną z szybkością 1 objętości szkła na 2 objętości mieszaniny. Gotować w wyciągu (bez korka) przez 1 godzinę, przestrzegając zasad bezpieczeństwa. Umyć do neutralnego pH wodą destylowaną. Suszyć w 100 ° C

Szklana kolumna, wstępnie obrobiona płynem silikonowym, wypełniona szkłem (2-3 cm3), nasączona wodą destylowaną. Do badanej próbki (3 l) dodać 1 M roztwór MgCl do końcowego stężenia 0,05 M. Wodę przepuszcza się przez kolumnę z prędkością 150-500 ml / godzinę, regulując natężenie przepływu za pomocą zacisków. Przepuścić przez kolumnę 10 ml roztworu elucyjnego: ekstrakt mięsny 3%, pH 9,0; lub bulion fosforanu tryptozy 1%, pH 9,0; lub Tris HCl 0,1 M, zawierający 2 M NaCl, pH 11,0 (roztwory są wymienione w celu zmniejszenia ich właściwości eluujących). Sorbuj frakcje o objętości 1 ml, pH we frakcjach doprowadza się do wartości neutralnej.

6.2. Wykrywanie cząstek wirusowych za pomocą mikroskopii elektronowej (EM) i mikroskopii immunoelektronowej (IEM)

Ponieważ zawartość cząstek rotawirusa w kale typowych pacjentów jest zwykle wysoka w pierwszych 2-3 dniach choroby, metoda EM jest szeroko stosowana do wykrywania rotawirusa, który może być stosowany do wykrywania cząstek rotawirusa bez dodatkowego stężenia zawiesiny kałowej.

W celu przygotowania leków kroplę badanej 10% zawiesiny nanosi się na płytkę wosku dentystycznego lub woskowanego papieru. Na spadek filmu-podłoża narzuć przedmiotową siatkę mikroskopu elektronowego. Po 1-3 minutach siatkę przemywa się kroplą wody destylowanej i roztworem kontrastowym (2% roztwór kwasu fosforotonowego, doprowadzonego do pH 6,5 - 6,6 za pomocą 1 NKOH), którego nadmiar po 30 - 40 sekundach. zdejmij bibułę filtracyjną, a siatka zostanie wysuszona. Przeglądanie preparatów odbywa się w mikroskopie elektronowym z powiększeniem instrumentalnym 30 - 50000x.

Rotawirusy są dość łatwo wykrywane przez badanie EM zawiesin kałowych w charakterystycznych rozmiarach i morfologii cząstek wirusowych. Rotawirusy należy odróżnić od różnych cząstek wirusa i formacji wirusopodobnych, cząstek bakteriofagów i bakteryjnych wici występujących w materiale kałowym.

Zastosowanie technologii IEM umożliwia w niektórych przypadkach nie tylko zwiększenie odsetka wykrywania rotawirusów, ale także udowodnienie ich etiologicznej roli. W badaniu IEM 0,1 ml rozcieńczonej surowicy odpornościowej 1: 5 zwierząt miesza się z 0,4 ml 10% ekstraktu kałowego. Mieszaninę inkubuje się przez 1 godzinę w temperaturze pokojowej, a następnie przez 12 godzin w 4 ° C, po czym odwirowuje się przez 90 minut. przy 15 000 obr / min Supernatant odsącza się i powstały osad ponownie zawiesza się w kilku kroplach wody destylowanej, kontrastując z 2% roztworem kwasu fosforowolframowego (pH 6,5) i umieszcza na siatkach obiektów; nadmiar wilgoci usuwa się za pomocą bibuły filtracyjnej. Badanie leków przeprowadza się w mikroskopie elektronowym z instrumentalnym powiększeniem 50000x, patrząc na co najmniej pięć komórek siatki przedmiotowej. W przypadku wyniku dodatniego cząstki rotawirusa wykrywa się w preparatach w postaci specyficznych klastrów (kompleksów immunologicznych).

6.3. Wykrywanie antygenu rotawirusa w badanym materiale

6.3.1. Uzyskiwanie immunoreagentów

Surowice hiperimmunizowane i swoiste immunoglobuliny rotawirusowe otrzymuje się przez immunizację królików, świnek morskich, kurcząt.

Antygen do immunizacji przygotowano w następujący sposób: 5 ml zawiesiny hodowlanej rotawirusa SA-II potraktowano trypsyną, dodano do 1,5-litrowych kolb materacowych z pojedynczą warstwą heteroploidalnych komórek nerki zielonej małpy 4647, inkubowano przez 60 minut w 37 ° C; dodać pożywkę podtrzymującą bez surowicy i inkubować przez 24 do 48 godzin w 37 ° C Wszystkie biomasy poddaje się 3-krotnemu zamrażaniu lub sonikacji, dodaje PEG M 6000 do 8-10% stężenia, pozostawia na 20 godzin w 4 ° C, a następnie odwirowuje przy 10 000 obr./min. 2 godziny Osad ponownie zawiesza się w PBS (1/30 - 1/50 objętości biomasy). Po oczyszczeniu freonem 113, fazę wodną stosuje się do immunizacji zwierząt i jako antygen w badaniach immunologicznych. Koncentrat o objętości 1 ml zawiera co najmniej 10 cząstek wirusowych.

Immunizacja królików: królikom wstrzykuje się dożylnie 2 ml preparatu rotawirusowego w dniach 1, 7, 35, 42 i pobiera się krew w dniu 49 po rozpoczęciu immunizacji. W dniach 1 i 35 antygen wstrzykuje się dodatkowym kompletnym adiuwantem Freunda w kilku punktach pleców.

Frakcję immunoglobulin wytrąca się z hiperimmunizowanej surowicy królika 10% wodnym roztworem glikolu polietylenowego (PEG) o masie cząsteczkowej 6000. Osad zbiera się przez odwirowanie, rozpuszcza i dializuje wobec 0,01 M buforu K-fosforanowego (pH - 7,4) z 0:01 M Nace ( FSB). Stężenie immunoglobulin określa się spektrofotometrycznie.

Immunizacja świnek morskich: zwierzętom wstrzykuje się domięśniowo 0,5 ml stężonego preparatu rotawirusa równą objętością kompletnego adiuwanta Freunda w dniu 1,14 i 28 dnia, pobieranie próbek krwi dwa tygodnie po ostatniej immunizacji.

Immunizacja kurcząt: 20-tygodniowe kurczęta kur niosek mieszańców rasy białej Leggorn „Zarya-17” są immunizowane dożylnie w 1, 14, 28 dni. Podczas pierwszej immunizacji antygen podaje się dodatkowo domięśniowo w mieszaninie z równą objętością kompletnego adiuwanta Freunda. Maksymalną ilość przeciwciała w żółtku obserwuje się po trzeciej immunizacji. Kurczaki mogą być używane na stałe po reimmunizacji.

Izolacja immunoglobulin kurcząt: żółtko oddziela się od białka w lejku muszelkowym lub Büchnera i przemywa wodą z kranu. Żółtko (10 ml) przenosi się do probówki wirówkowej, dodaje podwójną objętość (20 ml) FSB i dokładnie miesza. PEG 6000 nanosi się w stężeniu 3,5% (wag./obj.) I miesza przez 10 minut. na 14000 g. Supernatant przesącza się przez bibułę filtracyjną do cylindra miarowego. Dodaj dodatkowy PEG 6000 do końcowego stężenia 12% i wymieszaj. Wytrącone immunoglobuliny zbiera się przez wirowanie (10 min. 14 000). Osad rozpuszcza się w 5 ml FSB (1/2 objętości żółtka). Stężenie białka w preparacie wynosi zwykle 6-12 mg / ml.

6.3.2. Metoda testu immunoenzymatycznego (ELISA)

Metoda testu immunoenzymatycznego (ELISA), oparta na wykorzystaniu przeciwciał znakowanych cząsteczką enzymu (peroksydazą), jest jedną z najczęstszych i najbardziej skutecznych i specyficznych metod wykrywania antygenu wirusowego. Zwykle używa się bezpośrednich i pośrednich „kanapek” - opcji. Marker enzymatyczny wykryty w reakcji barwnej z substratem. Bezpośredni wariant ELISA jest szybszy niż pośredni, ale jest mniej czuły i specyficzny. W formulacji wariantu pośredniego stosuje się anty-specyficzny handlowy koniugat immunoglobulin z enzymem; Aby zapobiec niespecyficznym interakcjom między koniugatem a przeciwciałami pochłoniętymi na panelu, konieczne jest posiadanie surowic przeciwwirusowych dwóch różnych gatunków zwierząt.

Pośredni wariant ELISA: do studzienek wprowadza się 0,1 ml immunoglobulin anty-trombina z żółtka jaj immunizowanych kurcząt w połowie (48) studzienek. W drugiej połowie immunoglobuliny z jaj złożonych przed immunizacją wprowadza się jako kontrolę negatywną. Sorpcję immunoglobulin przeprowadza się z roztworu o stężeniu 5 μg / ml w PBS przez noc w 4 ° C. Zawartość studzienek odsącza się, studzienki przemywa się PBS-T i 0,1 ml próbki testowej nanosi się w PBS-T z 1% BSA i 0,01 M EDTA do studzienek z antyirotawirusem i normalnymi immunoglobulinami i inkubuje przez 1 godzinę w 37 ° C.

Po płukaniu do studzienek w buforze PBS-T dodaje się 0,1 ml surowicy króliczej anty-rotawirusa rozcieńczonej do 1: 1000-1: 25000. Optymalne rozcieńczenie surowicy określa się w ustalonych wcześniej eksperymentach. Panele zamyka się i inkubuje przez 2 godziny w 37 ° C. Studzienki przemywa się i dodaje 0,1 ml handlowego preparatu przeciwciał znakowanych peroksydazą przeciwko króliczym IgG w stężeniu 1 do 2,5 μg / ml w zawartości peroksydazy w PBSB-T-BSA i inkubuje przez 1 godzinę w 37 ° C. Studzienki przemywa się, dodaje 0,1 ml świeżo przygotowanej mieszaniny substratów (O-fenylenodiamina 0,5 mg / ml w 0,05 M buforze cytrynianowym Na pH o pH 5,0; HO - 0,03%. (Uwaga! Praca wymaga uważaj!)) i inkubuj w temperaturze pokojowej w ciemności przez 30-40 minut. Reakcję enzymatyczną zatrzymuje się przez dodanie 0,05 ml 3 M SO SO. Wyniki reakcji uwzględniają wizualnie lub spektrofotometrycznie. Próbki uważa się za dodatnie, których gęstość optyczna jest nie mniejsza niż 2-krotność gęstości optycznej kontroli ujemnej.

6.3.3. Metoda koagutynacji

Metoda ta opiera się na zdolności białka A Staphylococcus aureus ze szczepu Cowan do łączenia się z fragmentem Fc IgG, a podczas tworzenia specyficznego kompleksu antygen-przeciwciało powoduje zjawisko aglutynacji.

W celu sformułowania reakcji koagutynacji stosuje się handlowy suchy odczynnik gronkowcowy zawierający białko A (Pasteur Research Institute of Electrochemical Medicine, Leningrad), który jest ponownie uwadniany przed użyciem w 0,1% roztworze błękitu metylenowego.

Wcześniej każdą serię hiperimmunizowanej surowicy bada się pod kątem obecności przeciwciał antystaphylococcus. W tym celu na szklanym szkiełku wymieszać równe objętości surowicy w rozcieńczeniu 1: 500 i 10% zawiesiny gronkowca. Weź pod uwagę wyniki w ciągu 5 minut od rozpoczęcia edukacji. Do pracy z wybraną surowicą, która nie zawiera przeciwciał antyaphaphococcus w rozcieńczeniu 1: 500. W celu przygotowania diagnostyki 0,01 ml surowicy anty-ratawirusowej rozcieńczonej 1:10 z FSB miesza się z 0,5 ml 10% zawiesiny gronkowca, utrzymywanego w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę, a następnie dodaje się 9,5 ml FSB (diagnosticum). W ten sam sposób gronkowiec jest uczulany surowicą preimmunizacyjną (odczynnik kontrolny). W reakcji PKA i TRKA stosuje się diagnostykę i odczynnik kontrolny.

W celu stopniowania RCA w studzienkach w kształcie litery U panelu, wykonać 0,05 ml PBS o pH 7,4; w dwóch studzienkach zrobić mikrotitr lub dozownik Takacchi 0,05 ml 10% zawiesiny kału i przygotować seryjne dwukrotne rozcieńczenia 1: 2 - 1: 256. Do studzienek pierwszego rzędu dodać 0,05 ml diagnostyki, a do dołków drugiego rzędu 0,05 ml odczynnika kontrolnego. Panele przykrywa się pokrywką i inkubuje w termostacie w 37 ° C - 3 godziny. W każdym eksperymencie próbka zawiesiny kału była dodatnia i ujemna dla rotawirusa, a także lizaty komórek zakażonych rotawirusem SA-II, testowane wcześniej za pomocą mikroskopii elektronowej.

Uwzględnienie reakcji: wyniki uznaje się za dodatnie, gdy „parasol” aglutynacji wykryto wraz z diagnostyką, z wynikiem ujemnym lub 4-krotnym zmniejszeniem miana równolegle z odczynnikiem kontrolnym. Wyniki są uważane za negatywne, gdy dyski tworzą się w obu równoległych rzędach. W celu wyeliminowania niespecyficznej koaglutynacji w sparowanych rzędach, zawiesinę kału adsorbuje się równą objętością normalnej surowicy królika w 37 ° C przez 2 godziny, a następnie ogrzewa w 80 ° C przez 45 minut. Następnie ponownie przeżyj reakcję koagglutynacji.

6.3.4. Metoda reakcji koagutynacji w fazie stałej (TRKA)

Ta metoda wykrywania antygenów rotawirusowych opiera się na zasadach metody immunooznaczenia w fazie stałej (patrz 4.3.2). Jednakże, w przeciwieństwie do tego ostatniego, TRCA nie używa enzymu jako etykiety, ale diagnostyczny i kontrolny odczynnik (patrz 4.3.3).

Do oceny zaawansowania TRKA stosuje się panele immunologiczne ze studzienkami w kształcie litery U. W celu uczulenia do studzienek dodaje się 0,1 ml surowicy hiperimmunizowanej rozcieńczonej 0,01 M buforem węglanowo-wodorowęglanowym (pH 9,6) 1: 1000. Panele surowicy pozostawia się na 2 do 3 godzin w 37 ° C. Niezwiązane z przeciwciałami w fazie stałej usuwa się przez trzykrotne płukanie przez 3 minuty. FSBT. Następnie zrób 0,05 ml badanych, jak również oczywiście dodatnich i ujemnych próbek (2 dołki dla każdej próbki) w dołkach i pozostaw na 2 godziny w 37 ° C, aby utworzyć kompleksy antygen-przeciwciało. Niezwiązany antygen i pokrewne zanieczyszczenia są usuwane przez potrójne pranie PBS. Następnie w jednej studzience dodać 0,05 ml 0,5% diagnostyki gronkowca, w drugiej (kontrolnej) 0,05 ml 0,5% zawiesiny gronkowca uczulonego surowicą preimmunizacyjną (patrz 4.4.3). Inkubację prowadzi się przez 1 do 2 godzin w 37 ° C, a następnie umieszcza się przez 1 do 3 godzin w 4 ° C lub przez 18 do 24 godzin w 4 ° C. Wynik reakcji aglutynacji jest brany pod uwagę wizualnie: przy pozytywnej reakcji aglutynowane bakterie tworzą parasol; z negatywną reakcją - bakterie całkowicie osiadają w postaci dysku.

6.3.5. Metoda pośredniej hemaglutynacji

W tej metodzie wykrywanie antygenu rotawirusowego opiera się na zastosowaniu diagnostycznego przeciwciała erytrocytowego, które jest erytrocytami owiec uwrażliwionymi przez płyn puchlinowy immunoglobuliny białych szczurów immunizowanych rotawirusem SA-II.

Dwukrotne rozcieńczenia 10% zawiesiny kałowej w studzienkach panelowych bada się za pomocą diagnostyki erytrocytów. Aglutynacja erytrocytów diagnostycznych wskazuje na obecność antygenu rotawirusowego w próbce. Szczegółowy opis procedury formułowania PHA znajduje się w instrukcjach dołączonych do zestawu przygotowawczego (Stowarzyszenie Naukowo-Produkcyjne „Rostepidkompleks”, Rostów nad Donem).

Zestaw Rotatest opiera się na odwrotnej pasywnej hemaglutynacji i jest przeznaczony do wykrywania rotawirusa w kale i wykrywania przeciwciał przeciwko rotawirusowi w surowicach krwi.

6.3.6. Metoda immunocytochemicznego wykrywania rotawirusa

Metoda opiera się na immunochemicznym oznaczeniu antygenu wirusowego syntetyzowanego w komórkach w wyniku ich zakażenia materiałem zawierającym wirusy.

Zaletą metody w porównaniu z ELISA jest wyższa czułość, a także zdolność do określania i ilościowego oznaczania zakaźności próbki testowej.

Stopień zaawansowania eksperymentu: przeszczepione komórki nerki zielonej małpy w stężeniu od 3 do 10 komórek / ml wytwarzają 0,2 ml w studzienkach paneli o płaskim dnie i inkubują w 37 ° C (24 do 48 godzin). Komórki następnie przemywa się pożywką Eagle-MEM. Badany materiał rozcieńcza się w pożywce Eagle-MEM, aktywowanej przez 1 godzinę w 37 ° C w obecności 10 μg / ml trypsyny i dodaje się w 0,1 ml w co najmniej 4 studzienkach. Kontrole pozytywne to studzienki, w których wprowadzono materiał, o którym wiadomo, że zawiera rotawirus. Kontrole negatywne: dołki z niezainfekowanymi komórkami i studzienkami, w których materiał jest wprowadzany podobnie jak w teście, ale nie zawiera rotawirusów. Adsorpcję prowadzi się przez 1 godzinę w 37 ° C, następnie usuwa się pożywkę, komórki przemywa się pożywką Eagle-MEM. Dodać 0,2 ml pożywki Eagle-MEM z 1 μg / ml trypsyny do dołków i inkubować przez 48 godzin w 37 ° C.

Komórki przemywa się dwukrotnie solanką i utrwala w zimnym (-20 °) 85% acetonie, inkubuje przez 2 godziny w -20 ° C, a następnie usuwa aceton. Panel przemywa się 3 razy PBS zawierającym 0,05% Tween 20 (PBS-T). Do studzienek dodaje się 0,1 ml rozcieńczonego 1: 1000 w wścieklizny immunologicznej PBS-T przeciwko surowicy rotawirusowej. Inkubować przez 2 godziny w 37 ° C Po płukaniu panelu do studzienek dodaje się 0,1 ml znakowanego peroksydazą króliczego przeciwciała anty-IgG (preparat handlowy) do studzienki, w stężeniu 2 µg / ml przez zawartość peroksydazy w PBS z 1% BSA i inkubuje przez 1,5 godziny w 37 ° C C.

Panel przemywa się 2 razy PBS-T i 1 raz 0,05 M buforem octanowym, pH 5,0. Do studzienek dodaje się 0,1 ml świeżo przygotowanego roztworu substratu peroksydazy zawierającego 10 ml buforu octanowego / 4 mg 3-amino-9-etylokarbazolu (AEC) rozpuszczonego w 0,5 ml acetonu i 0,01 ml 33% nadtlenku wodoru. (Uwaga! Praca z AEC wymaga ostrożności). Inkubuj przez 30-40 minut. w ciemności w temperaturze pokojowej. Reakcję zatrzymuje się przez przemycie panelu wodą destylowaną.

Uwzględnienie reakcji prowadzi się pod mikroskopem świetlnym z małym powiększeniem. Dołki kontroli negatywnej nie mogą zawierać zabarwionych komórek. Lokalne skupiska barwionych komórek są ogniskami infekcji wirusowej.

6.3.7. Metoda immunofluorescencji

W celu identyfikacji antygenu rotawirusa przy użyciu immunofluorescencji stosuje się linię komórkową 4647. Komórki hoduje się na szkiełkach nakrywkowych lub szkiełkach zamkniętych w fiolkach lub probówkach penicylinowych. Zakażoną kulturę inkubuje się w 37 ° C przez 24 do 48 godzin, po czym szklanki usuwa się z fiolek, przemywa w 0,15 M roztworze soli z dodatkiem buforu fosforanowego o pH 7,2, płucze wodą destylowaną i suszy na powietrzu. Następnie preparaty utrwala się na dwie zmiany (po 10 minut) chemicznie czystego acetonu ochłodzonego do 4 ° C.

Preparaty są traktowane metodą pośrednią w wilgotnej komorze. Jedną kroplę surowicy królika immunologicznego rotawirusa nakłada się na komórki hodowlane i inkubuje przez 30 minut. w 37 ° C, leki są trzykrotnie przemywane w FSB i usuwają nadmiar wilgoci. Mokre preparaty barwiono mieszaniną równych objętości koniugatu anty-FITC i albuminy bydlęcej, znakowano rodaminą i inkubowano przez 30 minut. w 37 ° C Po 3-krotnym myciu w FSB preparaty suszy się na powietrzu. W celu wyeliminowania niespecyficznej fluorescencji, surowicę przeciwwirusową adsorbuje się przed użyciem z homogenatem normalnej hodowli komórkowej, a koniugat FITC traktuje się węglem aktywowanym zgodnie ze standardowymi metodami.

Jako obowiązkowe kontrole stosuje się następujące kontrole: preparaty niezainfekowanych kultur traktowane w podobny sposób i preparaty zakażonych kultur traktowane w pierwszym etapie normalnej i heterologicznej surowicy przeciwwirusowej tego samego gatunku co surowica odpornościowa rotawirusowi.

W przypadku wyników dodatnich obserwuje się wyraźną jasnozieloną fluorescencję w cytoplazmie komórek.

6.4. Metoda elektroforeotypowania rotawirusów

Metoda opiera się na identyfikacji rotawirusów za pomocą elektroforezy w żelu poliakrylamidowym segmentów genomowego RNA wirusa. Metoda pozwala na różnicowanie szczepów rotawirusa na podstawie różnic w ruchliwości elektroforetycznej poszczególnych segmentów RNA różnych izolatów, a zatem jest szeroko stosowana w badaniach epidemiologicznych. Metoda nie wymaga wstępnej hodowli izolatów, ma wysoką czułość i absolutną specyficzność.

Metoda ta jest szczególnie interesująca dla epidemiologów w badaniu chorób grupowych ognisk zakażenia rotawirusem.

Można to przeprowadzić na podstawie laboratoriów wyposażonych w aparat do elektroforezy.

Do analizy wystarcza 0,2 - 0,5 ml 10 - 20% zawiesiny kałowej. Zawiesiny traktowano freonem 113 i inkubowano z pronazą (0,2 mg / ml, 15 minut) w obecności dodecylosiarczanu sodu (1%) i etylenodiaminotetraoctanu sodu (0,001 M). Po dodaniu octanu sodu (0,3 M), RNA odbiałczono mieszaniną fenolu: chloroformu i alkoholu izoamylowego i wytrącono 2,5 objętościami etanolu (18 godzin w -20 ° C lub 2 godziny w -70 ° C). Osad zbiera się przez odwirowanie, rozpuszcza w wodzie i dodaje bufor do dysocjacji. Elektroforezę przeprowadza się zgodnie z metodą Laemmli na płytkach 10% żelu. Azotan srebra (0,011 M) jest zwykle stosowany do barwienia RNA w żelu. Po procedurze manifestacji w żelu widocznych jest 11 pasm RNA, odpowiadających segmentowi genomowemu rotawirusa.

6.5. Oznaczanie immunoglobuliny klasy M w surowicy

pacjent z zakażeniem rotawirusem metodą fazy stałej

reakcje krzepnięcia (TRCA)

W tym przypadku w modyfikacji stosuje się zasadę reakcji krzepnięcia w fazie stałej (patrz 4.3.4): w celu uwrażliwienia studzienek panelowych, użyć 0,1 ml komercyjnej monospecyficznej surowicy jagnięcej przeciwko ludzkiej IgM, w rozcieńczeniu 1: 1000. Panele inkubuje się przez 2-4 godziny w 37 ° C. Następnie studzienki przemywa się FSBT, wypełnia 3% roztworem żelatyny i pozostawia na 30 minut w 37 ° C. Studzienki przemywały FSBT i wytwarzały 0,05 ml badanej, jak również celowo dodatniej i ujemnej surowicy rozcieńczonej 1: 100 FSBT (2 otwory na każdą surowicę). Podczas określania miana przeciwciał badane są podwójne rozcieńczenia badanych próbek (1:10 - 1: 1280). Panele inkubuje się przez 2 godziny w 37 ° C i po płukaniu 0,05 ml odczynnika diagnostycznego i kontrolnego wprowadza się do sparowanych studzienek. Reakcja jest brana pod uwagę po 1 - 2 godzinach (patrz wyżej 4.3.4).

Ta sama zasada, zmodyfikowana przez TRCA, jest stosowana do testowania przeciwciał IgA i IgG pod kątem zakażenia rotawirusem, a także do analizy siary i mleka dla laktoglobulin.

Metoda oznaczania immunoglobuliny klasy M w surowicy pacjenta jest wykorzystywana zarówno do wczesnego diagnozowania postaci manifestujących się, jak i ich różnicowania z bezobjawowymi postaciami zakażenia rotawirusem.

7. Środki antyepidemiczne

Każdy przypadek ostrego zakażenia jelit wywołanego przez rotawirusy, zwłaszcza dzieci w pierwszym roku życia, a także dzieci uczęszczające do placówek przedszkolnych, wymaga starannej analizy epidemiologicznej, aby zidentyfikować źródło, główne sposoby i czynniki transmisji w celu terminowego wdrożenia środków przeciw epidemii w wybuchu.

Środki mające na celu identyfikację i neutralizację źródła infekcji. Wykrywanie pacjentów podejrzanych o chorobę przeprowadzają lekarze wszystkich instytucji medycznych: podczas wizyt ambulatoryjnych, wizyt domowych, badań lekarskich dzieci w instytucjach, szpitalach itp. Zidentyfikowani pacjenci są izolowani od grup dzieci. Obserwację medyczną i leczenie pacjentów można przeprowadzać w domu lub w szpitalu. Dzieci uczęszczające do placówek dla dzieci wypisanych ze szpitala lub które ukończyły leczenie domowe z ujemnymi wynikami badań laboratoryjnych są przyjmowane do grup dziecięcych na podstawie świadectwa pediatry. Dzieci, które miały WG i nadal wydalają rotawirusy (lub antygen rotawirusowy) z kałem bez objawów klinicznych zakażenia, mogą zostać przyjęte do przedszkoli i grup przedszkolnych przedszkoli i przedszkoli, pod warunkiem organizacji ciągłej obserwacji medycznej i powtarzanych badań laboratoryjnych w ciągu 2-3 tygodni od początku choroby lub izolacji wirusa.

Badanie epidemiologiczne ognisk rodzinnych pacjentów z FG przeprowadza się z chorobą dzieci poniżej 2 roku życia i dorosłych z liczby dekretowanych kontyngentów. Epidemiolog udaje się do placówki dla dzieci z ankietą, czy powtarzają się przypadki nie-bakteryjnego zapalenia żołądka i jelit.

Obserwacja medyczna dzieci porozumiewających się z pacjentami odbywa się w ciągu pięciu dni od daty izolacji ostatniej chorej osoby.

Badania laboratoryjne dla rotawirusów (antygenów) dzieci i dorosłych, którzy komunikowali się z pacjentami, zarówno w rodzinie, jak iw grupach zorganizowanych, przeprowadza się zgodnie z instrukcjami infekologa i epidemiologa, jeśli istnieją wskazania (występowanie w rodzinie lub w zespole dziecięcym powtarzających się chorób OK w podobnej klinice), rażące naruszenie reżimu sanitarnego i higienicznego, obecność w wybuchu pracowników przedsiębiorstw spożywczych i zrównanych z nimi osób itp.). Obowiązkowe badanie laboratoryjne podlega matce chorego dziecka w pierwszym roku życia. Osoby, u których rotawirusy (antygen) znajdują się w kale, podlegają dokładnemu badaniu klinicznemu przez specjalistę od chorób zakaźnych. W przypadku braku objawów klinicznych choroby dzieci i pracownicy z zespołu nie są izolowani.

Pracownicy przedsiębiorstw spożywczych, usługi wodne itp. w czasie ponownego badania laboratoryjnego i nadzoru medycznego są zatrudnieni w obiekcie. Powtarzane badanie laboratoryjne osób wydalających rotawirusy (antygen) z kałem, przeprowadza się zgodnie z receptą infekologa i epidemiologa w odstępie 5-7 dni, stosując kompleksowe badanie laboratoryjne.

Jeśli choroby grupowe występują w placówkach dziecięcych, środki kwarantanny są przeprowadzane w ciągu 5 dni od momentu izolacji ostatniego pacjenta.

Instytucje regularnie prowadzą prace sanitarne i edukacyjne mające na celu zapobieganie zakażeniu rotawirusem.

Środki mające na celu przełamanie mechanizmu przenoszenia infekcji.

Badania wykazały szkodliwy wpływ na rotawirusy w temperaturze + 70 ° C po 15 minutach; po ekspozycji na promieniowanie ultrafioletowe rotawirusy są także inaktywowane po 15 minutach.

Pod względem ich odporności na działanie powszechnie stosowanych środków dezynfekujących, rotawirusy są bliskie enterowirusom i wirusowemu zapaleniu wątroby typu A. Dlatego w ośrodkach zakażenia rotawirusem i szpitalach, w których występują pacjenci, wskazane jest przeprowadzenie środków dezynfekcji zgodnie ze schematami i za pomocą środków zalecanych dla wirusowego zapalenia wątroby A i zakażenia enterowirusem (załącznik N 4 do rozporządzenia Ministerstwa Zdrowia ZSRR N 752 z dnia 07/08/81 i zarządzenia Ministerstwa Zdrowia ZSRR N 916 z 08/04/83). Szczególną uwagę należy zwrócić na właściwe obchodzenie się z rękami osób obsługujących dzieci, a także sutków, zabawek, naczyń i innych przedmiotów do opieki nad pacjentem.

Zaleca się regularne napromieniowanie ultrafioletem. Promieniowanie ultrafioletowe jest zwykle przeprowadzane przy użyciu promienników - OBN-150 na 30 metrach sześciennych. m pokoje, OBP-300 60 cu. m pokoje i inne. Nieekranowane kanały ustawione w tempie 1 - 1,5 W na 1 cu. m pokoje pod nieobecność ludzi (w celu uniknięcia uszkodzenia śluzowych oczu), ekranowane - w tempie 2 - 2,5 W na 1 cu. m, napromieniowanie może być przeprowadzone w obecności ludzi. Czas dezynfekcji - 30 - 40 minut. Napromieniowanie powietrza należy przeprowadzić po oczyszczeniu pokoju, zmianie pościeli i innych prac związanych z tworzeniem aerozolu pyłu.

W wyspecjalizowanych oddziałach personelu szpitalnego należy nosić maski oddechowe.

Organizację środków sanitarnych i higienicznych mających na celu zapobieganie zakażeniu rotawirusem przeprowadza się zgodnie z aktualnymi instrukcjami i zaleceniami dotyczącymi innych zakażeń mechanizmem kału i jamy ustnej rozprzestrzeniania się patogenu.

Jednym ze skutecznych środków zapobiegających zakażeniu rotawirusem u noworodków jest karmienie piersią.

Nie przeprowadza się specyficznego zapobiegania zakażeniu rotawirusem.